產(chǎn)品描述

運動神經(jīng)元(MN)維持培養(yǎng)基是一種適用于人類運動神經(jīng)元(Human motor neuron, hMN)，無血清，無動物源成分的完全培養(yǎng)基，hMN 在本培養(yǎng)基中可以持續(xù)存活并成熟為表達CHAT的成熟MN，適用于體外研究。

產(chǎn)品信息

表1. MN維持培養(yǎng)基組成信息

注：括號內(nèi)容如50×為母液濃度，使用時終濃度需為1×。例如MN維持培養(yǎng)基補充劑(50×)需添加進MN維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基使其稀釋50倍，使得補充劑終濃度為1×，配成MN維持培養(yǎng)基。

實驗試劑與材料

表2. 推薦試劑&材料

實驗內(nèi)容與方法(以6孔板1個孔為例)

一、完全培養(yǎng)基配制

(1) 在 4℃解凍MN維持培養(yǎng)基補充劑(50×)，不要在 37℃條件下解凍。

(2) 在生物安全柜中，按照實驗用量，例如若用量為50 mL，配制方法為49 mL MN維持基礎(chǔ)培養(yǎng)基+1mL MN維持培養(yǎng)基補充劑(50×)配成MN維持培養(yǎng)基。

(3) 分化培養(yǎng)基建議現(xiàn)配現(xiàn)用，置于 4℃儲存，2 周內(nèi)使用。

注：補充劑可根據(jù)使用量進行分裝以避免反復(fù)凍融。

二、MN復(fù)蘇

(1) 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)混合均勻。在300g條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)后吹勻。

(2) 將所有細胞懸液加入含適量MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)的基質(zhì)膠或laminin 521包被的六孔板(1孔)中培養(yǎng)過夜。

(3) 24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

三、細胞傳代(當(dāng)有實驗需求時可按培養(yǎng)器皿底面積1:1比例接種傳代)

(1) 棄去培養(yǎng)基，加入1-2 mL Accutase(含10μM IMC-014-Y)，置于37℃培養(yǎng)箱消化2-5min。

(2) 2-5 min后每孔加入等量 MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)，輕輕吹打細胞，使細胞解離成單細胞。

(3) 將細胞懸液收集到15 mL離心管中，室溫下300 g離心3 min。

(4) 仔細抽吸上清液，不干擾細胞，用1mL恢復(fù)室溫的MN維持培養(yǎng)基重懸細胞(含10μM IMC-014-Y)，輕輕地上下移液以確保細胞溶液均勻。

(5) 使用MN維持培養(yǎng)基(含10μM IMC-014-Y)稀釋細胞，將細胞以1:1比例接種到基質(zhì)膠或laminin 521包被的六孔板(1孔)或35mm皿中培養(yǎng)過夜(按底面積算，1個T25相當(dāng)于六孔板2.5個孔，六孔板1孔可傳12孔板的2孔，24孔板的4孔，96孔板的6孔)。24h后，換成不含IMC-014-Y的MN維持培養(yǎng)基(MN貼壁不牢固，換液動作需輕緩)，視培養(yǎng)基顏色或隔2天換液。

注：①MN不能擴增，盡量減少傳代。