293T人胚腎細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告）

貨號(hào)：IM-H222 來(lái)源：ATCC

規(guī)格：1×10⁶cells/T25或1mL凍存管

形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基：90% DMEM+10% FBS+PS

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

293T細(xì)胞是貼壁細(xì)胞，但其貼壁能力比較弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象

人腎上皮細(xì)胞系HEK293T細(xì)胞說(shuō)明書

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背景簡(jiǎn)介

293細(xì)胞株插入SV40 T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生株稱為293T。

一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱	293T人胚腎細(xì)胞（STR鑒定報(bào)告）
細(xì)胞別稱	Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T; 293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
種屬來(lái)源	人
組織來(lái)源	腎
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)	10代以內(nèi)
STR位點(diǎn)	Amelogenin:X；CSF1PO:11,12；D13S317:12,14；D16S539:9,13；D18S51:17,18；D21S11:28,30.2；D3S1358:15,16,17；D5S818:8,9；D7S820:11；D8S1179:12,14；FGA:23；PentaD:9,10；PentaE:7,15；TH01:7,9.3；TPOX:11；VWA:16,19
STR鑒定圖片
生物安全等級(jí)	1
細(xì)胞規(guī)格	1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)	無(wú)
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635；中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫(kù)
倍增時(shí)間	~24-30 hours
培養(yǎng)基	90% DMEM+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
細(xì)胞貨期	現(xiàn)貨，1周左右
特別注意	293T細(xì)胞貼壁不牢，運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞會(huì)有脫落，如細(xì)胞脫落，請(qǐng)離心收集，消化后重新鋪瓶
產(chǎn)品貨期	現(xiàn)貨，1周左右
運(yùn)輸方式	復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用）順豐快遞
供應(yīng)限制	僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說(shuō)明	以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主
293T人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題
1.293T細(xì)胞形態(tài)是什么樣的? 293t細(xì)胞形態(tài)呈上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)。 2.到貨的293T細(xì)胞脫落，如何處理? 293T細(xì)胞因?yàn)橘N壁松散，若購(gòu)買常溫細(xì)胞，收貨時(shí)有可能大部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁，顯微鏡下找不到細(xì)胞，只能看到肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)，是正常現(xiàn)象。收到細(xì)胞后請(qǐng)先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定4-6h后再進(jìn)行下一步處理，不建議放置培養(yǎng)箱過(guò)夜后處理。處理步驟 1.將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無(wú)菌離心管，1000rpm離心4min收集細(xì)胞； 2.去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞(以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹)，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次1000rpm離心4min； 3.去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞(還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細(xì)胞), 放入培養(yǎng)箱消化2min； 4.消化2min后，加入5mL完全培養(yǎng)基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，1200rpm離心3min； 5.去掉上清，加入6mL左右細(xì)胞相應(yīng)的完全培養(yǎng)基混勻，視細(xì)胞量決定是1:2傳代還是1:3傳代(由于細(xì)胞運(yùn)輸有損傷，首次傳代建議比平時(shí)養(yǎng)密度稍高)； 6.顯微鏡下觀察細(xì)胞是否有分散成單顆現(xiàn)象，若有明顯很大的細(xì)胞團(tuán)需要重復(fù)上述步驟二次消化; 7.第二天及時(shí)觀察細(xì)胞貼壁情況，若貼壁細(xì)胞量過(guò)多，造成細(xì)胞堆積，貼壁24h后再次傳代分瓶，若密度正常則繼續(xù)生長(zhǎng)，不建議換液貼壁48h后換液去掉不能貼壁的細(xì)胞。 3.293T人胚腎細(xì)胞傳代后聚團(tuán)嚴(yán)重? 原因分析 a.胰酶消化操作不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。消化過(guò)度或吹打過(guò)猛導(dǎo)致細(xì)胞受傷嚴(yán)重，破損的細(xì)胞碎片容易粘連聚團(tuán)。 b.消化時(shí)293T細(xì)胞融合率太高，成片脫落，將不容易被吹散，容易聚團(tuán)。 c.鑒于293T細(xì)胞貼壁疏松，普通0.25%胰酶消化時(shí)間控制10s-40s(不同胰酶牌子消化時(shí)間不同);吹打動(dòng)作輕柔，充分分散;細(xì)胞融合率達(dá)到80%-90%即可傳代，不可長(zhǎng)的太滿。 d.細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的成分：一些細(xì)胞培養(yǎng)基的成分可能促進(jìn)細(xì)胞的聚集，例如含有過(guò)多的膠原蛋白或其他黏附蛋白。 e. 細(xì)胞質(zhì)粘附不良：有些細(xì)胞可能由于細(xì)胞表面蛋白或黏附分子的缺失導(dǎo)致粘附能力下降，從而容易聚集在一起。 f 培養(yǎng)條件不當(dāng)：細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的pH、溫度、氣體條件等因素如果不適當(dāng)可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞聚集。 g. 感染或污染：細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的感染或污染可能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生異常反應(yīng)，包括聚集在一起形成團(tuán)塊。 4.293T人胚腎細(xì)胞換了血清批次后聚團(tuán)嚴(yán)重? 原因分析血清批次間存在差異。293T細(xì)胞本身有聚團(tuán)生長(zhǎng)特性，但嚴(yán)重聚團(tuán)可能是由于受到血清里的某些因子刺激。先用血清試用裝，試用效果好，可購(gòu)買和血清試用裝批次相同的正裝，有效避免批間差對(duì)細(xì)胞的影響。 5.293T人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染病毒后凋亡嚴(yán)重？在排查了方法步驟和轉(zhuǎn)染試劑，依然沒(méi)有改善的情況下，可排查一下轉(zhuǎn)染前的營(yíng)養(yǎng)體系，尤其是血清批間差帶來(lái)的影響。前期培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)正常，其實(shí)細(xì)胞形態(tài)學(xué)只是鑒別細(xì)胞是否健康的一個(gè)外在指標(biāo)，還要結(jié)合細(xì)胞其它指標(biāo)對(duì)細(xì)胞健康進(jìn)行評(píng)定(比如倍增時(shí)間，存活率)。通過(guò)更換血清批次，再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)并觀察轉(zhuǎn)染后的效果，比較分析出原因。 6.293T人胚腎細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn) 293T人胚腎細(xì)胞貼壁性較差，容易飄起來(lái)，37℃靜置可重新貼壁。換液時(shí)注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶，否則有可能會(huì)把細(xì)胞搖下來(lái)。 293T人胚腎細(xì)胞容易消化，消化下來(lái)的細(xì)胞容易成團(tuán)，要吹打吹散。否則傳代后細(xì)胞會(huì)成團(tuán)生長(zhǎng)，不均勻，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)293T人胚腎細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合率達(dá)到80~90%需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代操作，以擴(kuò)大細(xì)胞數(shù)量，維持細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。細(xì)胞貼壁松散，操作時(shí)應(yīng)輕拿輕放;PBS潤(rùn)洗時(shí)動(dòng)作應(yīng)緩慢，避免沖走細(xì)胞; 細(xì)胞傳代第二天可能有輕微聚團(tuán)現(xiàn)象，再長(zhǎng)一天能長(zhǎng)開，不建議傳代第二天換液，以免損失細(xì)胞。隨著傳代的次數(shù)增加，293T細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)狀態(tài)下降，出現(xiàn)突變等情況。所以要在細(xì)胞購(gòu)進(jìn)時(shí)就進(jìn)行大量?jī)龃?，以保證實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和持續(xù)性。 7.293T人胚腎細(xì)胞特點(diǎn) a.細(xì)胞貼壁能力比較弱：293T細(xì)胞是貼壁細(xì)胞，但其貼壁能力比較弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。比如：運(yùn)輸?shù)蜏丶罢鹗?、在室溫條件下靜置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、添加的培養(yǎng)基或其他試劑溫度過(guò)低、培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞密度過(guò)高、細(xì)胞聚集時(shí)未吹散、加液吹打時(shí)觸碰了細(xì)胞表面等。若脫落現(xiàn)象不嚴(yán)重應(yīng)將細(xì)胞盡快放回培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，若出現(xiàn)大片脫落的現(xiàn)象需要收集細(xì)胞重新消化吹散再接種。 b.細(xì)胞本身偏嗜酸性，培養(yǎng)基消耗較快；293T細(xì)胞在略偏酸性的環(huán)境下生長(zhǎng)狀態(tài)更好，在培養(yǎng)過(guò)程中需要時(shí)刻注意培養(yǎng)基的pH值。在細(xì)胞密度達(dá)到70%以上時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)基的消耗速度較快，需要時(shí)刻觀察并及時(shí)換液。 c.細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)聚集成島：293T細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)呈島狀聚集生長(zhǎng)，會(huì)逐步向外擴(kuò)散直到完全融合。 d.細(xì)胞聚集成團(tuán)之后很難再吹散：293T細(xì)胞傳代過(guò)程中一定要注意吹散細(xì)胞，同時(shí)接種的密度不可過(guò)高。密度過(guò)高容易使細(xì)胞抱團(tuán)，導(dǎo)致難以再次吹散，會(huì)在培養(yǎng)器皿中形成類似于球狀的聚集體貼壁生長(zhǎng)。導(dǎo)致即使培養(yǎng)條件合適細(xì)胞也難以生長(zhǎng)。
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
到貨方式	復(fù)蘇細(xì)胞/T25瓶運(yùn)輸
收貨處理	1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，是否有破損、漏液、渾濁等現(xiàn)象。如果有，請(qǐng)立即和我們聯(lián)系；如果沒(méi)有，請(qǐng)您用75%酒精消毒細(xì)胞瓶外壁，再將其置于37度培養(yǎng)箱靜置4h。 2.靜置后觀察細(xì)胞狀態(tài)，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，最好在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20X物鏡下，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。拍照反饋給我們。
傳代密度	細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代方法	1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 3.按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 4.將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
到貨方式	凍存細(xì)胞/1ml凍存管運(yùn)輸
收貨處理	1.干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞到貨，請(qǐng)檢查干冰是否完全揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞，如若不能復(fù)蘇請(qǐng)立即轉(zhuǎn)入液氮凍存。
培養(yǎng)皿/瓶	一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
復(fù)蘇操作	1.將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。 2.在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。 3.然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。 4.第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
注意事項(xiàng)	1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。 3. 凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。 4. 申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，建議客戶在細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。 5.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。 6. 細(xì)胞在不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)由于所使用培養(yǎng)基及血清品牌、個(gè)人操作習(xí)慣、培養(yǎng)瓶品牌等諸多培養(yǎng)條件不盡相同，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)、生長(zhǎng)速度、貼壁情況均可能有所差異，對(duì)于此類細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境生長(zhǎng)的行為，不予過(guò)度解釋或免費(fèi)售后。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
凍存密度	如果是有要求每管要凍多少細(xì)胞，那就用1ml完培重懸后，取部分按平時(shí)方法計(jì)數(shù)，剩下的細(xì)胞按計(jì)數(shù)需要的細(xì)胞量?jī)龃婕纯伞? 如果沒(méi)要求，那就按平時(shí)，一個(gè)皿凍一管。
凍存方法	待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 1.收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 2.根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x10⁶~1x10⁷/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。 3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
注意事項(xiàng)	凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

參考文獻(xiàn)

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作者：Jiang L, Shen J, Zhang N, He Y, Wan Z

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2022年影響因子/JCR分區(qū)：5.942/Q2

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作者：Chen S, Chen X, Li Z, Mao J, Jiang W, Zhu Z, Li Y, Jiang Z, Zhao W, Tan G, Wang Z.

細(xì)胞：293T, SVGp12, U-87 MG, U-118 MG, U-251 MG, T98G, and A172 cells

2022年影響因子/JCR分區(qū)：4.996/Q2

LncRNA FAM13A-AS1 Promotes Renal Carcinoma Tumorigenesis Through Sponging miR-141-3p to Upregulate NEK6 Expression. Front Mol Biosci. 2022 Mar 23;9:738711. doi: 10.3389/fmolb.2022.738711. PMID: 35402517; PMCID: PMC8984162.

作者：Wang XJ, Li S, Fang J, Yan ZJ, Luo GC.

細(xì)胞：293 T cells

2022年影響因子/JCR分區(qū)：6.113/Q1

Long Intergenic Noncoding RNA 00641 Promotes Growth and Invasion of Colorectal Cancer through Regulating miR-450b-5p/GOLPH3 Axis. J Oncol. 2022 Jun 15;2022:8259135. doi: 10.1155/2022/8259135. PMID: 35756081; PMCID: PMC9217543.

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2022年影響因子/JCR分區(qū)：4.501/Q2

Low-dose metformin targets the lysosomal AMPK pathway through PEN2. Nature. 2022 Mar;603(7899):159-165. doi: 10.1038/s41586-022-04431-8. Epub 2022 Feb 23. PMID: 35197629; PMCID: PMC8891018.

作者：Ma T, Tian X, Zhang B, Li M, Wang Y, Yang C, Wu J, Wei X, Qu Q, Yu Y, Long S, Feng JW, Li C, Zhang C, Xie C, Wu Y, Xu Z, Chen J, Yu Y, Huang X, He Y, Yao L, Zhang L, Zhu M, Wang W, Wang ZC, Zhang M, Bao Y, Jia W, Lin SY, Ye Z, Piao HL, Deng X, Zhang CS, Lin SC.

細(xì)胞：HEK293T cell line

2022年影響因子/JCR分區(qū)：69.504/Q1

MiR-548d-3p Promotes Gastric Cancer by Targeting RSK4. Cancer Manag Res. 2020 Dec 24;12:13325-13337. doi: 10.2147/CMAR.S278691. PMID: 33380838; PMCID: PMC7769082.

作者：Liang H, Hu C, Lin X, He Z, Lin Z, Dai J.

細(xì)胞：Stomach cancer cell lines,HGC-27 and MGC-803 , and 293T

其他：DMEM, fetal bovine serum (FBS) and penicillin-streptomycin

2022年影響因子/JCR分區(qū)：3.602/Q3

MiR-145-5p Suppresses Hepatocellular Carcinoma Progression by Targeting ABHD17C.

作者：Wang, L., Ma, X., Chen, Y., Zhang, J., Zhang, J. et al.

細(xì)胞：HEK293T and Hep3B cells

2022年影響因子/JCR分區(qū)：0.900/Q4

細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基是否需要預(yù)熱

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基需要預(yù)熱?。預(yù)熱培養(yǎng)基可以減少環(huán)境的改變對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的影響，避免細(xì)胞因溫度變化而產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，從而保持細(xì)胞的健康狀態(tài)和生長(zhǎng)環(huán)境的一致性??？梢蕴崆鞍胄r(shí)左右，將培養(yǎng)基、PBS和胰酶在37°C下預(yù)熱，把所需耗材和其他物品放置于超凈工作臺(tái)中紫外照射滅菌。

血清使用前需不需要滅活

一般培養(yǎng)細(xì)胞所使用的血清不需要滅活，滅活會(huì)導(dǎo)致血清部分營(yíng)養(yǎng)損失、沉淀增多，滅活的優(yōu)勢(shì)(主要是滅活補(bǔ)體以免影響細(xì)胞生長(zhǎng))在實(shí)際培養(yǎng)過(guò)程中對(duì)于促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)并沒(méi)有太大意義。部分細(xì)胞對(duì)于生長(zhǎng)條件敏感，可以嘗試滅活血清培養(yǎng)，但大部分細(xì)胞并不需要。

血清融化后有沉淀會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎

血清沉淀主要是纖維蛋白等蛋白、磷酸鹽、脂類等經(jīng)凍融后析出，導(dǎo)致血清內(nèi)出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，該現(xiàn)象與血清品質(zhì)無(wú)關(guān)，大部分品牌的血清都會(huì)有這種情況，不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，只是培養(yǎng)時(shí)可能偶爾觀察到血清沉淀，注意區(qū)分血清沉淀和細(xì)胞污染即可。

細(xì)胞為何生長(zhǎng)不均勻

細(xì)胞傳代后放入培養(yǎng)箱沒(méi)有搖勻，或者放入時(shí)搖勻，但在細(xì)胞貼壁前，又移動(dòng)了培養(yǎng)瓶，頻繁開關(guān)培養(yǎng)箱引起的振動(dòng)或者培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液過(guò)少，培養(yǎng)箱擱板表面不平整，這些因素會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不均勻。

細(xì)胞抱團(tuán)怎么處理

一些懸浮細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)是正?，F(xiàn)象，大部分懸浮細(xì)胞在細(xì)胞密度很高的情況下，很可能會(huì)出現(xiàn)部分細(xì)胞抱團(tuán)生長(zhǎng)的現(xiàn)象，聚團(tuán)細(xì)胞很容易死亡并演化成絮狀物，殃及周圍的懸浮細(xì)胞，因此在培養(yǎng)懸浮細(xì)胞時(shí)需控制好細(xì)胞密度。如果出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)，可以通過(guò)細(xì)胞篩去掉部分較大的細(xì)胞團(tuán)，也可以嘗試一下方法：將細(xì)胞懸液收集到15 ml離心管中，靜置20 min左右，小心取上層細(xì)胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細(xì)胞團(tuán))。

細(xì)胞內(nèi)有空泡，是否是正?，F(xiàn)象

部分細(xì)胞本身存在一定的空泡(如HepG2，Ishikawa及一些耐藥株等)，這個(gè)是正?，F(xiàn)象。如果只有少數(shù)細(xì)胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡，則很可能是細(xì)胞狀態(tài)不佳，可以通過(guò)調(diào)整血清濃度，控制消化，控制傳代比例及時(shí)間等方法來(lái)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài);如果大部分細(xì)胞出現(xiàn)空泡，且單個(gè)細(xì)胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多，則可能細(xì)胞代次較高，細(xì)胞老化所致，需更換代次較早的細(xì)胞。

細(xì)胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細(xì)胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系)；或者消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞有嚴(yán)重影響；或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細(xì)胞，傳代太稀；或者生長(zhǎng)較快的細(xì)胞，傳代較密，細(xì)胞嚴(yán)重堆疊生長(zhǎng))。

如何區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞

顯微鏡下觀察：活細(xì)胞中間透亮，飽滿，有光澤，死細(xì)胞較暗。也可以通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色來(lái)計(jì)算細(xì)胞活力。

何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞

用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000 個(gè)/毫升，在0.1 毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞，注意計(jì)數(shù)需在加入臺(tái)盼藍(lán)10min內(nèi)完成。有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的，可直接用計(jì)數(shù)儀進(jìn)行

何時(shí)須更換培養(yǎng)基

視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2天更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好

一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至完全匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過(guò)密(也就是常說(shuō)的長(zhǎng)老了)，但有接觸抑制的細(xì)胞，在匯合前就必須進(jìn)行傳代，這類細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代，否則會(huì)引起細(xì)胞分化。

貼壁細(xì)胞總有部分圓形還會(huì)有一些漂浮的是正常嗎

大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)都會(huì)有一些圓形透亮的細(xì)胞存在，也會(huì)有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞，只要細(xì)胞持續(xù)增殖，都會(huì)有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實(shí)驗(yàn)，保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫(kù)不同細(xì)胞照片比對(duì)，大部分貼壁細(xì)胞都會(huì)有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。

細(xì)胞內(nèi)很亮小泡泡是什么東西

一部分情況下細(xì)胞內(nèi)小亮點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)黑色顆粒或者一些粘附在細(xì)胞表面的碎片，這種黑點(diǎn)會(huì)在調(diào)整顯微鏡焦距時(shí)呈小黑點(diǎn)或者小亮點(diǎn)，容易被誤認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)小泡，其實(shí)只是細(xì)胞內(nèi)部或表面一些物質(zhì)折光形成的光學(xué)現(xiàn)象。也有些是細(xì)胞內(nèi)部脂滴，例如3T3-L1細(xì)胞在部分培養(yǎng)條件下可以明顯看到內(nèi)部脂滴，染色后更加清晰。

部分細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)確實(shí)可能會(huì)有空泡，可以參考細(xì)胞庫(kù)照片比對(duì)。若細(xì)胞突然出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)空泡增多現(xiàn)象，通常是細(xì)胞受到壓力的表現(xiàn)，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加抗真菌劑、不適當(dāng)?shù)腃O2環(huán)境對(duì)培養(yǎng)基中碳酸氫鈉濃度影響或培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)消耗殆盡。

細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)小黑點(diǎn)、污染如何防范

可從以下幾個(gè)方面進(jìn)行判斷：細(xì)胞小黑點(diǎn)如何判斷 1、運(yùn)動(dòng)性：很多會(huì)動(dòng)的小黑點(diǎn)，只是發(fā)生布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞碎片。從運(yùn)動(dòng)性上比較，浮躁的細(xì)菌活躍的多。 2、培養(yǎng)基的渾濁度：如果在顯微鏡下無(wú)法辨認(rèn)，那就交給時(shí)間吧。細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)是非常營(yíng)養(yǎng)的大餐。一旦發(fā)生污染，細(xì)菌就會(huì)大量繁殖。培養(yǎng)基PH值迅速下降，培養(yǎng)基變黃且會(huì)變渾濁。通常在12小時(shí)內(nèi)就可以發(fā)現(xiàn)，而在48小時(shí)內(nèi)就非常明顯。被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基變黃且渾濁、未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基偏紅且澄清。 3、接種平板：將懷疑污染物接種在微生物培養(yǎng)平板中，觀察菌落形成情況。碎片?細(xì)菌?一目了然。

細(xì)胞培養(yǎng)形態(tài)與ATCC等官網(wǎng)照片有點(diǎn)區(qū)別正常嗎?

由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境、操作方法、培養(yǎng)基及血清品牌批次不同，細(xì)胞實(shí)際培養(yǎng)形態(tài)、狀態(tài)、生長(zhǎng)速度等培養(yǎng)特性均有可能發(fā)生改變，甚至顯微鏡拍攝效果對(duì)細(xì)胞形態(tài)判斷都會(huì)有有一定影響。因此細(xì)胞形態(tài)只能作為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的參考項(xiàng)目，無(wú)法作為細(xì)胞狀態(tài)或者類型的判斷依據(jù)。實(shí)際上，細(xì)胞在不同細(xì)胞庫(kù)培養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)都可能存在一定差異。

科研細(xì)胞購(gòu)買常見問(wèn)題

問(wèn)：為什么官網(wǎng)的培養(yǎng)條件和我看的文獻(xiàn)里細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣呢？

答：部分細(xì)胞是會(huì)出現(xiàn)多種培養(yǎng)條件，我們公司優(yōu)先選擇引種來(lái)源的培養(yǎng)條件以及建系者所用培養(yǎng)條件，出現(xiàn)差異的原因是不同實(shí)驗(yàn)室在保藏過(guò)程中更改了細(xì)胞的培養(yǎng)條件，為了避免細(xì)胞突然更換培養(yǎng)條件后不適應(yīng)，建議老師使用廠家推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存細(xì)胞運(yùn)輸與常溫細(xì)胞運(yùn)輸相比有什么區(qū)別？

答：細(xì)胞株發(fā)貨有常溫或者凍存兩種形式，常溫細(xì)胞貨期一般一周左右，復(fù)蘇活細(xì)胞一個(gè)T25瓶發(fā)貨；凍存細(xì)胞有庫(kù)存的話，一般當(dāng)天或者隔天可以發(fā)貨，細(xì)胞系凍存細(xì)胞擔(dān)心客戶復(fù)蘇不成功所以贈(zèng)送了一管，實(shí)際發(fā)貨2管；原代凍存細(xì)胞發(fā)貨1管，凍存細(xì)胞發(fā)貨是10公斤干冰及順豐運(yùn)輸，所以凍存細(xì)胞需額外支付干冰及運(yùn)輸費(fèi)200元。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶可以重復(fù)利用嗎？

答：一般不建議重復(fù)利用，特別是貼壁不牢固細(xì)胞，重復(fù)利用會(huì)導(dǎo)致吸附性變差，漂浮增多;一個(gè)T25瓶建議使用最多不超過(guò)3次，其次需要注意無(wú)菌操作，避免污染。

問(wèn)：運(yùn)輸細(xì)胞用的培養(yǎng)基可以回收使用嗎?

答：不能回收使用的，運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)在路上已經(jīng)消耗得差不多，所以收到細(xì)胞之后，培養(yǎng)箱靜置4-6h之后，請(qǐng)及時(shí)按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件更換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)。

問(wèn)：凍存的細(xì)胞出現(xiàn)顏色不一致，有的紅有的粉，對(duì)復(fù)蘇會(huì)有影響嗎？

答：這種情況容易在不同凍存批次間出現(xiàn)，與凍存細(xì)胞的密度、凍存液配方、溫度導(dǎo)致pH變化等有關(guān)，偶爾有遇到這種情況，不是絕對(duì)性對(duì)細(xì)胞狀態(tài)有影響，可以復(fù)蘇看下。

問(wèn)：不同引種單位的同一株細(xì)胞，RRID都是一樣的嗎？

答：是的，同一個(gè)細(xì)胞系只有一個(gè)RRID。

科研細(xì)胞株售后規(guī)定

1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液，細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況等，重發(fā)

2.細(xì)胞免費(fèi)售后期為一周，一周內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)異常及時(shí)拍照反饋。超出一周沒(méi)有任何反饋視為細(xì)胞培養(yǎng)正常，后期若出現(xiàn)培養(yǎng)問(wèn)題不再免費(fèi)重發(fā)

3.申請(qǐng)售后時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞收貨時(shí)及反饋售后當(dāng)天細(xì)胞清晰照片及培養(yǎng)信息，若無(wú)清晰照片及相應(yīng)信息，不予免費(fèi)售后

4.售后僅針對(duì)由于細(xì)胞自身狀態(tài)問(wèn)題導(dǎo)致不可傳代的情況，若客戶收貨一周內(nèi)已經(jīng)傳代或轉(zhuǎn)移細(xì)胞多次，出現(xiàn)死亡或者污染時(shí)不予免費(fèi)售后

5.凍存細(xì)胞發(fā)貨2管，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶未反饋并復(fù)蘇2管失敗，我方將不提供免費(fèi)售后服務(wù)。凍存細(xì)胞售后均發(fā)復(fù)蘇培養(yǎng)，若要重發(fā)凍存細(xì)胞，需補(bǔ)加200元干冰運(yùn)輸費(fèi)用

6.客戶自行凍存細(xì)胞一定要注意凍存后復(fù)蘇一管檢查凍存活性，避免凍存死亡導(dǎo)致絕種。我方不對(duì)客戶凍存細(xì)胞死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡時(shí)不予免費(fèi)售后

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