同源異體小鼠腫瘤模型是免疫腫瘤學(xué)(I/O)研究中不可或缺的臨床前模型，但它們對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑(ICIs)的反應(yīng)有限，這可能是由于它們的固有低免疫原性。為了解決這一問(wèn)題，研究人員通過(guò)將雞卵清蛋白(OVA)這一高度免疫原性的蛋白質(zhì)表達(dá)到同源異體腫瘤細(xì)胞中，開(kāi)發(fā)了新的免疫原性同源異體模型。這些模型，如DC2.4-OVA和B16-OVA，顯示出比它們的親本細(xì)胞系更慢的腫瘤生長(zhǎng)速度，這可能是由于免疫介導(dǎo)的排斥反應(yīng)。更重要的是，這些OVA表達(dá)的模型對(duì)ICIs，特別是抗PD-1治療，表現(xiàn)出更高的敏感性，這表明它們?cè)谠鰪?qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)方面具有潛力。此外，通過(guò)過(guò)繼T細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，研究人員驗(yàn)證了這些模型中存在腫瘤特異性記憶T細(xì)胞。這些結(jié)果表明，OVA工具細(xì)胞不僅增強(qiáng)了對(duì)ICIs的反應(yīng)，而且為臨床前免疫治療評(píng)估提供了新的、具有更高免疫原性的同源異體模型，這對(duì)于I/O研究具有重要的意義。

基本信息

英文標(biāo)題：Dasatinib changes immune cell profiles concomitant with reduced tumor growth in several murine solid tumor models

中文標(biāo)題：哮喘相關(guān)炎癥通過(guò)CCL11-CCR3通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞肺轉(zhuǎn)移

發(fā)表期刊：《Cancer Immunol Res》

影響因子：8.1

作者單位：

1.Hematology Research Unit Helsinki, Helsinki University Hospital Comprehensive Cancer Center, University of Helsinki, Finland

2.Research and Development, Bristol-Myers Squibb, Princeton, New Jersey, USA

3.Cancer Gene Therapy Group, Transplantation Laboratory, Pathology and HUSLAB, University of Helsinki, Finland

作者信息：Can Hekim, Mette Ilander, Jun Yan, Erin Michaud, Richard Smykra

研究背景

達(dá)沙替尼是一種廣譜酪氨酸激酶抑制劑(TKI)，已知在白血病治療中通過(guò)動(dòng)員淋巴細(xì)胞和激活細(xì)胞毒性細(xì)胞發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。然而，其在實(shí)體瘤中的免疫效應(yīng)尚不明確。本研究旨在探究達(dá)沙替尼是否能在多種小鼠實(shí)體瘤模型(黑色素瘤、肉瘤、結(jié)腸癌、乳腺癌)中通過(guò)免疫調(diào)控抑制腫瘤生長(zhǎng)，并解析其機(jī)制。重點(diǎn)關(guān)注達(dá)沙替尼對(duì)CD8+ T細(xì)胞浸潤(rùn)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)及外周免疫細(xì)胞動(dòng)態(tài)的影響。

研究方法

研究采用四種同源小鼠實(shí)體瘤模型(B16.OVA黑色素瘤、1956肉瘤、MC38結(jié)腸癌、4T1乳腺癌)，通過(guò)每日灌胃給予達(dá)沙替尼(30 mg/kg)或?qū)φ杖軇ｓw外實(shí)驗(yàn)評(píng)估達(dá)沙替尼對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接毒性(MTT法、集落形成實(shí)驗(yàn))。免疫表型分析通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血及腫瘤組織中的淋巴細(xì)胞亞群(CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、Tregs)，并結(jié)合CyTOF質(zhì)譜技術(shù)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞進(jìn)行深度分型。通過(guò)抗體耗竭實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證T/NK細(xì)胞在抗腫瘤中的作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1：達(dá)沙替尼劑量依賴(lài)性誘導(dǎo)外周白細(xì)胞快速動(dòng)員

單次給藥后1小時(shí)，達(dá)沙替尼(50-150 mg/kg)顯著增加外周血白細(xì)胞(WBC)及淋巴細(xì)胞比例(P<0.05)。在黑色素瘤模型中，30 mg/kg劑量組WBC增加5.36倍(對(duì)照組2.0倍，P=0.02)，表明達(dá)沙替尼可快速動(dòng)員免疫細(xì)胞。

圖2：達(dá)沙替尼無(wú)直接細(xì)胞毒性但抑制體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)體外實(shí)驗(yàn)顯示達(dá)沙替尼(≤100 nM)對(duì)B16.OVA黑色素瘤細(xì)胞無(wú)直接殺傷作用(K562細(xì)胞敏感)，但體內(nèi)顯著抑制腫瘤體積(P=0.03)，提示其抗腫瘤效應(yīng)依賴(lài)免疫調(diào)節(jié)。

圖3：達(dá)沙替尼改變外周淋巴細(xì)胞表型

治療第8天，達(dá)沙替尼組外周CD8+ T細(xì)胞比例升高(16.6% vs. 13.2%，P=0.001)，NK細(xì)胞比例及活化標(biāo)志物CD107a+ NK細(xì)胞增加(P=0.08)，顯示其對(duì)免疫細(xì)胞表型的動(dòng)態(tài)調(diào)控。

圖4：達(dá)沙替尼促進(jìn)CD8+ T細(xì)胞腫瘤浸潤(rùn)并依賴(lài)T/NK細(xì)胞功能

免疫組化顯示達(dá)沙替尼組腫瘤內(nèi)CD8+ T細(xì)胞數(shù)量顯著增加(中位數(shù)17 vs. 4，P=0.03)，且T/NK細(xì)胞耗竭后其抗腫瘤效應(yīng)完全消失(P<0.006)。

圖5：達(dá)沙替尼廣譜抑制實(shí)體瘤生長(zhǎng)

在肉瘤、結(jié)腸癌及乳腺癌模型中，達(dá)沙替尼均顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)(P<0.001)，體外僅高濃度(500 nM)對(duì)部分腫瘤細(xì)胞有輕微毒性，進(jìn)一步支持其免疫依賴(lài)性。

圖6：CyTOF揭示腫瘤內(nèi)Tregs減少

達(dá)沙替尼治療組腫瘤內(nèi)FoxP3+ Tregs比例顯著下降(P<0.05)，CD4+ T細(xì)胞減少，單核細(xì)胞比例增加，提示其通過(guò)重塑腫瘤免疫微環(huán)境發(fā)揮療效。

研究結(jié)論

達(dá)沙替尼通過(guò)免疫調(diào)節(jié)顯著抑制多種實(shí)體瘤生長(zhǎng)，其機(jī)制包括：快速動(dòng)員外周血CD8+ T細(xì)胞并降低CD4/CD8比值，增加腫瘤內(nèi)CD8+ T細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)減少調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)比例;T/NK細(xì)胞耗竭實(shí)驗(yàn)證實(shí)其抗腫瘤作用完全依賴(lài)于免疫系統(tǒng)。在黑色素瘤、肉瘤、結(jié)腸癌及乳腺癌模型中均觀察到一致效果，且體外實(shí)驗(yàn)顯示達(dá)沙替尼無(wú)直接細(xì)胞毒性。該研究支持達(dá)沙替尼作為免疫調(diào)節(jié)劑與其他療法聯(lián)用的潛力。