第一節(jié) 傳代條件（以24孔板培養(yǎng)為例）

1. 當孔中小腸類器官群體增殖(占膠85%左右)，且平均直徑為100-150 μm時，小腸類器官細胞狀態(tài)良好時，即可立即傳代，否則小腸類器官的生長和增殖速度會減慢，活力逐漸降低。

第二節(jié) 傳代間隔和比例

1. 可根據細胞生長狀態(tài)和實驗需求按1:3-1:5的比列進行傳代；

2. 如果細胞正常，群體增殖度85%，大小為100-150 μm，建議按照1:5進行傳代；

3. 如果密度偏低，則可降低傳代比例，密度偏高，則增加傳代比例。

第三節(jié) 準備工作

1. 解凍分裝Matrigel，預冷5 mL Immocell Reactive detergent medium ，200uL槍頭；

2. 提前30 min將Immocell MLDT organoid 完全培養(yǎng)基，Immocell Y-27632(10 mM) 放置生物安全柜中，恢復至室溫；

3.吸取4 mL Immocell MLDT organoid 完全培養(yǎng)基，按照1:1000比例加入4 μl的Immocell Y-27632(10 mM)，充分混勻，恢復至室溫。