第一節(jié) 傳代條件（以24孔板培養(yǎng)為例）

1. 當(dāng)孔中小腸類(lèi)器官群體增殖(占膠85%左右)，且平均直徑為100-150 μm時(shí)，小腸類(lèi)器官細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，即可立即傳代，否則小腸類(lèi)器官的生長(zhǎng)和增殖速度會(huì)減慢，活力逐漸降低。

第二節(jié) 傳代間隔和比例

1. 可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)需求按1:3-1:5的比列進(jìn)行傳代；

2. 如果細(xì)胞正常，群體增殖度85%，大小為100-150 μm，建議按照1:5進(jìn)行傳代；

3. 如果密度偏低，則可降低傳代比例，密度偏高，則增加傳代比例。

第三節(jié) 準(zhǔn)備工作

1. 解凍分裝Matrigel，預(yù)冷5 mL Immocell Reactive detergent medium ，200uL槍頭；

2. 提前30 min將Immocell MLDT organoid 完全培養(yǎng)基，Immocell Y-27632(10 mM) 放置生物安全柜中，恢復(fù)至室溫；

3.吸取4 mL Immocell MLDT organoid 完全培養(yǎng)基，按照1:1000比例加入4 μl的Immocell Y-27632(10 mM)，充分混勻，恢復(fù)至室溫。