RAW 264.7細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中密度過(guò)大，培養(yǎng)基顏色發(fā)黃都易刺激細(xì)胞分化，分化的RA264.7細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時(shí)常有較長(zhǎng)的黑色觸角，那么RAW 264.7細(xì)胞如何避免分化及分化該處理呢?

RAW 264.7小鼠巨噬細(xì)胞背景簡(jiǎn)介

RAW 264.7細(xì)胞是從Abelson小鼠白血病病毒(MuLV)誘導(dǎo)的腫瘤中建立的雄性小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞系，Raschke等人于1976年首次報(bào)道了該細(xì)胞系。RAW 264.7細(xì)胞sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW 264.7細(xì)胞不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。根據(jù)Janet W.Hartley博士在2008年發(fā)表的一項(xiàng)研究，RAW 264.7細(xì)胞被證明表達(dá)生態(tài)性和多向性MuLV，并且使用XC噬斑試驗(yàn)對(duì)病毒復(fù)制呈陽(yáng)性。RAW 264.7細(xì)胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞分解紅血球，但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。RAW 264.7細(xì)胞易于繁殖，DNA轉(zhuǎn)染效率高，對(duì)RNA干擾敏感，并支持小鼠諾如病毒的復(fù)制，可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、免疫系統(tǒng)紊亂和免疫學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

RAW 264.7小鼠巨噬細(xì)胞分化如何處理

一、RAW 264.7細(xì)胞如何避免細(xì)胞分化

RAW 264.7細(xì)胞消化時(shí)不能用胰酶消化，消化會(huì)造成細(xì)胞分化，客戶可以用移液槍吹打，會(huì)比巴氏吸管方便一點(diǎn)。

二、RAW 264.7細(xì)胞分化處理

前面我們說(shuō)到RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。在這邊我們推薦“吹打傳代”方法，其操作步驟簡(jiǎn)單，也能更好地控制細(xì)胞分化率。

(一)吹打傳代操作步驟

1.輕拍幾下培養(yǎng)皿

2.用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來(lái)

3.細(xì)胞吹下來(lái)后轉(zhuǎn)移到15ml離心管

4.1200rpm(約250g) 離心3min

5.去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞

6.按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

(二)吹打傳代時(shí)機(jī)

1.當(dāng)細(xì)胞密度較低的時(shí)候，可能不太好吹下來(lái)。

2.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時(shí)候，最容易吹下。

(三)操作注意事項(xiàng)

1.RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；

2.分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候請(qǐng)勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；

3.吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；

4.細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時(shí)RAW 264.7 會(huì)出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時(shí)更適宜用巴氏管吹打；

5.存在少量分化細(xì)胞，培養(yǎng)時(shí)，無(wú)法保證100% 不分化，通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍。RAW264.7細(xì)胞形態(tài)主要為圓形。因其對(duì)環(huán)境非常敏感，在培養(yǎng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)少量短梭形或多角形的分化細(xì)胞，這是正?，F(xiàn)象。分化的細(xì)胞貼壁牢固，而未分化的細(xì)胞貼壁松散。根據(jù)貼壁松緊差異，可將未分化的細(xì)胞吹下，并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

6. 對(duì)胰酶敏感。RAW264.7細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶敏感，接觸胰酶后將很快發(fā)生自發(fā)分化，貼壁變緊，很難消化下來(lái)。所以不建議用胰酶對(duì)該細(xì)胞進(jìn)行傳代。

7. 生長(zhǎng)較快RAW264.7細(xì)胞生長(zhǎng)速度較快，建議每天觀察細(xì)胞密度，當(dāng)細(xì)胞密度到達(dá)80%時(shí)及時(shí)進(jìn)行傳代，以防細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)狀態(tài)變差。