常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實(shí)驗(yàn)服,并且具有氣候性,多雨······
發(fā)布時間：2025-04-21 09:46:32 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量：103
黑色素瘤是一種由黑色素細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化形成的高度侵襲性皮膚腫瘤，其發(fā)病率逐年上升且易早期轉(zhuǎn)移，晚期患者因耐藥性和免疫逃逸機(jī)制導(dǎo)致生存率顯著降低。構(gòu)建黑色素瘤成瘤模型(如體外細(xì)胞系、基因工程小鼠模型、患者來源異種移植模型及類器官等)對揭示其發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制至關(guān)重要，這類模型可模擬腫瘤微環(huán)境異質(zhì)性、轉(zhuǎn)移特性和藥物反應(yīng)差異，為靶向治療篩選、免疫療法優(yōu)化及耐藥機(jī)制研究提供可控平臺。其科學(xué)價值不僅在于加速抗腫瘤藥物研發(fā)進(jìn)程，更能通過個性化模型推動精準(zhǔn)醫(yī)療，為臨床轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
細(xì)胞名稱：B16F10-FLuc-puro小鼠黑色素瘤(FLUC標(biāo)記)
種屬來源：小鼠
組織來源：皮膚
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣混有梭形細(xì)胞
背景介紹：Luciferase B16F10細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株是來源于小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞B16的亞克隆株之一，從C57BL/6J 品系小鼠的皮膚黑色素瘤組織中分離而來。
puro藥篩濃度：B16F10-FLuc-puro細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml puro維持
培養(yǎng)須知：首次復(fù)蘇或長期未用嘌呤霉素時，建議用含嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48小時以清除非抗性細(xì)胞。建議定期備份低代次細(xì)胞，并記錄熒光素酶活性數(shù)據(jù)以確保實(shí)驗(yàn)一致性。如有特殊需求(如無血清培養(yǎng))，需逐步馴化并驗(yàn)證基因穩(wěn)定性。雙標(biāo)記(FLuc+Puro)確保長期基因穩(wěn)定性，但需持續(xù)篩選壓力。
| 細(xì)胞系 | 基因修飾 | 常用模型 | 成瘤潛伏期(天) | 成瘤率 | 轉(zhuǎn)移性 | 成像兼容性 |
| B16F10-FLuc-puro | FLUC+puro抗性 | 肺轉(zhuǎn)移、皮下荷瘤 | 5-7 | >95% | 高(肺轉(zhuǎn)移>80%) | 高(活體生物發(fā)光成像) |
| B16F10-Luc1 | FLUC(無抗性篩選) | 肺轉(zhuǎn)移、皮下荷瘤 | 5-7 | ~90% | 高(肺轉(zhuǎn)移>70%) | 中高(信號衰減較快) |
| A375-FLuc-Puro | FLUC+puro抗性 | 免疫缺陷鼠皮下荷瘤 | 14-21 | ~70% | 低(需基因增強(qiáng)轉(zhuǎn)移) | 中(需免疫缺陷鼠) |
| A2058-Luc | FLUC(無抗性篩選) | 免疫缺陷鼠轉(zhuǎn)移模型 | 10-14 | ~80% | 中(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) | 中(背景噪音較高) |
1. 成瘤時間：皮下接種后約5-7天可見明顯腫瘤(接種量5×10? cells/只)。
2. 成瘤率：接近100%(免疫健全小鼠)。
3. 轉(zhuǎn)移傾向：高轉(zhuǎn)移性(靜脈注射后肺轉(zhuǎn)移率>80%;皮下原位瘤自發(fā)轉(zhuǎn)移率較低)。
4. 高轉(zhuǎn)移亞系：篩選方法：通過反復(fù)體內(nèi)傳代篩選出高侵襲亞系，肺轉(zhuǎn)移能力提升至60%。
5. 適用模型：肺轉(zhuǎn)移模型、皮下荷瘤模型、原位黑色素瘤模型
6. 成像兼容性：表達(dá)FLuc的B16F10細(xì)胞可用于活體生物發(fā)光成像(BLI)監(jiān)測腫瘤生長和轉(zhuǎn)移
| 產(chǎn)品貨號 | 細(xì)胞系 | 成瘤率 | 物種來源 | 轉(zhuǎn)移傾向 | 應(yīng)用場景 |
| IM-M002 | B16F10 | +++ | 小鼠(C57BL/6) | 高(肺轉(zhuǎn)移>80%) | 活體成像監(jiān)測、轉(zhuǎn)移機(jī)制研究、免疫治療評估 |
| - | B16F1 | +++ | 小鼠(C57BL/6) | 低(肺轉(zhuǎn)移<20%) | 原位腫瘤模型、局部藥物遞送研究、腫瘤微環(huán)境分析 |
| IM-H332 | A375 | ++ | 人(皮膚原發(fā)) | 低(需基因增強(qiáng)轉(zhuǎn)移) | 靶向治療(BRAF/MEK抑制劑)、人源腫瘤異種移植(PDX模型) |
| IM-H440 | A2058 | ++ | 人(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) | 中(淋巴結(jié)傾向性轉(zhuǎn)移) | 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移機(jī)制、化療耐藥性研究、臨床前藥物篩選(免疫缺陷鼠) |
| IM-H243 | MeWo | + | 人(皮膚轉(zhuǎn)移) | 中(自發(fā)肺/肝轉(zhuǎn)移) | 轉(zhuǎn)移微環(huán)境模擬、EMT(上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化)研究、耐藥性模型 |
| IM-H463 | SK-MEL-28 | ++ | 人(皮膚原發(fā)) | 低(局部侵襲為主) | 免疫檢查點(diǎn)抑制劑測試、非BRAF突變型黑色素瘤 |
| 類別 | 具體因素 | 影響說明 |
| 細(xì)胞因素 | 1. 細(xì)胞活力與狀態(tài)(傳代次數(shù)、凍存/復(fù)蘇操作) 2. 熒光素酶表達(dá)穩(wěn)定性 3. 支原體污染 | 低活力或熒光素酶表達(dá)衰減會導(dǎo)致成瘤失敗;支原體污染抑制細(xì)胞增殖。 |
| 宿主因素 | 1. 小鼠品系(C57BL/6 vs. 免疫缺陷鼠) 2. 年齡與免疫狀態(tài) 3. 飼養(yǎng)環(huán)境(溫度、應(yīng)激水平) | C57BL/6小鼠因免疫排斥可能抑制成瘤;老齡或免疫異常小鼠模型穩(wěn)定性差。 |
| 操作因素 | 1. 接種部位(皮下、尾靜脈、原位) 2. 接種細(xì)胞數(shù)量與體積 3. 是否使用基質(zhì)膠(Matrigel) | 皮下接種易操作但轉(zhuǎn)移率低;尾靜脈需高細(xì)胞活性;基質(zhì)膠可增強(qiáng)局部成瘤率。 |
| 檢測因素 | 1. 熒光素酶底物(D-熒光素)濃度與注射時間 2. 成像設(shè)備靈敏度 3. 麻醉劑對生物發(fā)光的影響 | 底物劑量不足或成像延遲導(dǎo)致信號弱;部分麻醉劑(如異氟烷)可能抑制熒光素酶活性。 |
| 優(yōu)化方向 | 具體因素 | 影響說明 |
細(xì)胞處理 | 1. 嚴(yán)格質(zhì)量控制：復(fù)蘇后檢測細(xì)胞活力(>90%)、熒光素酶活性及支原體污染。 2. 避免高傳代(建議<15代)，定期驗(yàn)證熒光素酶表達(dá)(如活體成像或裂解液檢測)。 | 高傳代導(dǎo)致基因不穩(wěn)定，熒光素酶表達(dá)可能丟失(Puromycin抗性需持續(xù)加壓維持)。 |
| 宿主選擇 | 1. 免疫缺陷小鼠(如NOD/SCID或NSG)用于高成瘤率研究。 2. C57BL/6小鼠需年輕(6-8周)、健康，接種前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。 | 免疫缺陷鼠缺乏T/B細(xì)胞，減少對同源B16F10細(xì)胞的排斥反應(yīng)。 |
| 接種優(yōu)化 | 1. 皮下接種：細(xì)胞數(shù)1×10^6~5×10^6/只，混合50% Matrigel(4℃預(yù)冷操作)。 2. 尾靜脈接種：細(xì)胞數(shù)2×10^5~1×10^6/只，懸浮于PBS(避免結(jié)團(tuán)) | Matrigel提供基質(zhì)支持，模擬微環(huán)境;尾靜脈需單細(xì)胞懸液防止肺栓塞。 |
| 成像檢測 | 1. 底物注射：D-熒光素150 mg/kg(腹腔注射)，10-15分鐘后成像。 2. 使用低抑制性麻醉劑(如異氟烷)，避免苯巴比妥類。3. 校準(zhǔn)設(shè)備參數(shù)(曝光時間、分辨率)。 | D-熒光素代謝快，需控制時間窗;異氟烷對熒光素酶活性影響較小(文獻(xiàn)支持)。 |
| 實(shí)驗(yàn)設(shè)計 | 1. 設(shè)置空白對照組(未標(biāo)記細(xì)胞)排除背景信號。 2. 分批接種避免操作誤差，每組≥5只小鼠。 3. 長期實(shí)驗(yàn)時定期傳代驗(yàn)證細(xì)胞特性。 | 減少個體差異;確保模型可重復(fù)性。 |
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
| 成瘤率低(<50%) | 細(xì)胞活性不足、免疫排斥、接種細(xì)胞數(shù)過低 | 提高細(xì)胞數(shù)至5×10^6/只，使用免疫缺陷鼠，或聯(lián)合免疫抑制劑(如抗CD4抗體) |
| 熒光信號衰減 | 熒光素酶基因沉默、底物失效、成像參數(shù)錯誤 | Puromycin加壓維持表達(dá)，更換底物批次，重新優(yōu)化成像條件 |
| 轉(zhuǎn)移模型不顯著 | 尾靜脈接種細(xì)胞結(jié)團(tuán)、小鼠品系抗轉(zhuǎn)移性強(qiáng) | 過濾細(xì)胞懸液(40 μm濾網(wǎng))，改用高轉(zhuǎn)移性亞系(如B16F10-Luc2-Bioware) |
| 研究目的 | 實(shí)驗(yàn)設(shè)計 |
評估免疫療法療效 | 將B16F10接種于C57BL/6小鼠，分組給予PD-1抗體或?qū)φ眨O(jiān)測腫瘤體積及生存期 |
| 研究肺轉(zhuǎn)移機(jī)制 | 尾靜脈注射B16F10細(xì)胞，通過活體成像定量肺轉(zhuǎn)移灶，分析轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達(dá)譜。 |
| 測試靶向藥物耐藥性 | 構(gòu)建B16F10耐藥株，聯(lián)合PI3K抑制劑處理，評估凋亡率及信號通路變化。 |
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