產(chǎn)品簡(jiǎn)介

膠原酶(Collagenase)是一種蛋白酶，一種肽鏈內(nèi)切酶，能夠特異性的識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(該序列高頻率出現(xiàn)在膠原中，很少發(fā)現(xiàn)于其他蛋白中)并切割該序列中性氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。許多蛋白酶都能水解單鏈且變性的膠原多肽，但膠原酶是唯一 一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶，這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織內(nèi)。

本品來源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum)，是一種酶粗提物，不僅含有膠原酶(更準(zhǔn)確的稱法為梭菌蛋白酶A(clostridiopeptidase A)，能夠降解天然膠原和網(wǎng)狀纖維。還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分別能夠有效水解結(jié)締組織和上皮組織細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)的其他蛋白，多糖和脂質(zhì)，使得本品非常適用于組織消化。該產(chǎn)品適用于人類腫瘤、小鼠腎臟、人類成人和胎兒腦、肺和許多其他上皮組織的解聚。它還被證明可有效用于肝臟和腎臟灌注研究、胰腺消化、非實(shí)質(zhì)大鼠肝細(xì)胞的分離以及肝細(xì)胞的制備。 膠原酶已用于研究晚期糖基化終產(chǎn)物所需的動(dòng)脈組織的制備。該酶已經(jīng)測(cè)試可以約1 mg/mL的濃度釋放肝細(xì)胞。

產(chǎn)品信息

目前商業(yè)化提供的細(xì)菌膠原酶主要根據(jù)膠原酶活性的差異，分為五種類型：膠原酶I型，II型，III型，IV型和Ⅴ型。

在應(yīng)用上有所偏向

(1)膠原酶I(Type I Collagenase)：含有比較均勻的各種酶活力(包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性),通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備;

(2)膠原酶II(Type II Collagenase)：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備;

(3)膠原酶III(Type III Collagenase)：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備;

(4)膠原酶IV(Type IV Collagenase)：含有低胰酶活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。

本品為III型膠原酶，≥100 U/mg solid，常用于乳腺細(xì)胞和胎兒細(xì)胞的制備。

酶活力單位定義

在37℃，pH7.5 的條件下，5 h內(nèi)水解膠原產(chǎn)生相當(dāng)于1 μM L-亮氨酸的酶量定義為1個(gè)酶活力單位。

使III型膠原酶用說明

1.膠原酶儲(chǔ)存液的配制

(1)向每管100 mg的膠原酶中加入1 mL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液，含Ca2+、Mg2+)，輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成100 mg/mL(即100×)的儲(chǔ)存液。

(2)用低蛋白結(jié)合性的0.22 μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。

(3)使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5 mg/mL，用于軟骨消化的常用濃度為1-2 mg/mL，需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的 最佳工作濃度。

2.組織的分離

(1)使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4 mm大小的組織塊;

(2)利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次;

(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度;

(4)于37℃孵育4-18 h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3 mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。

(5)已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育;

(6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次;

(7)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。

(8)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

3. 器官灌注

(1)向37℃預(yù)熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率;

(2)按照已優(yōu)化的速率對(duì)相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液;

(3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育;

(4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次;

(5)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。

(6)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

III型膠原酶注意事項(xiàng)

1.儲(chǔ)存液-20℃避光凍存。

2.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。