不戴奶罩的邻居HD中文,中文字幕免费高清电视剧网站,中文在线字幕观看电视剧,《被按摩的人妻中文字幕》,强辱丰满人妻HD中文字幕,《美味人妻3》韩国中文字幕

細胞株購買:18046200267 廈門愛恪信生物細胞株引進ATCC,DSMZ,JCRB,ECACC,CCTCC,昆明細胞庫等保藏中心,正規(guī)來源,細胞準(zhǔn)確

細胞爬片固定實驗步驟及注意事項

發(fā)布時間:2024-06-13 10:38:41 細胞資源庫平臺 訪問量:798

爬片是一種將細胞培養(yǎng)在玻璃或塑料表面上,使其附著并擴展的技術(shù)。一般是讓玻片浸在細胞培養(yǎng)基內(nèi),使細胞在玻片上生長。這種技術(shù)可以用于觀察細胞形態(tài)、運動、細胞與細胞之間相互作用等。利用細胞爬片進行體外實驗可排除體內(nèi)諸多干擾因素的影響,方便對細胞進行各種干預(yù)處理。

在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細胞爬片,爬片質(zhì)量決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今日為大家整理了細胞進行爬片固定制作步驟及注意事項,幫助您快速上手開展實驗。

細胞爬片固定實驗步驟及注意事項

細胞爬片準(zhǔn)備

1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用專用爬片;

2.將蓋玻片剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時用小沙輪輕劃一下,稍用力掰開。如接種大皿,請不要將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,待染色時再切開,這樣既保證了細胞均一性,又可同時做多個指標(biāo)的染色。

3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡過夜,次日用自來水沖20遍,置于無水j精中浸泡6小時,再用三蒸水沖洗3遍(主要目的是將酸沖洗干凈,以免影響細胞貼壁效果),置于玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。

4.高壓消毒后取出放入烤箱中烤干,放入超凈臺備用。

細胞爬片制作

1.胰酶消化細胞后,計數(shù)重懸細胞于完全培養(yǎng)基中。

2.根據(jù)玻片的大小加入細胞,向每孔中預(yù)留的放置爬片的位置處滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿粘合到一起,然后放入玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。

3.根據(jù)需要選擇合適的細胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

4.待細胞貼壁后,去上清,加含藥培養(yǎng)基。

5.按照實驗設(shè)計,一段時間后取出玻片。取玻片時,將注射器針尖向背面彎曲,將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出。

6.將所需數(shù)量的爬片取出時,應(yīng)用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞爬片固定

1.細胞爬片取出后,用PBS洗2遍再做固定(此步驟可根據(jù)研究目的做取舍,比如做凋亡細胞染色時可免洗,凋亡的細胞在清洗的過程中有可能脫落)。

2.用培養(yǎng)皿保存細胞爬片。在皿底放一層面巾紙,再放爬片,(方便取片)。然后蓋上蓋子,做好標(biāo)記,用透明膠帶將蓋子和皿連在一起,-20℃保存。

3.放-20℃保存之前,吸干培養(yǎng)基或PBS,-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。

細胞爬片常用的固定液

1.冷丙酮:可用于一般的免疫組化染色。

將純的丙酮預(yù)先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會為固體的)細胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強的揮發(fā)性,注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴(yán),防止其揮發(fā))固定10分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。

2.多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。

主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胞分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。

室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,-20℃保存

3. 95%乙醇,可用于免疫組化。

優(yōu)點:穿透性強、抗原性保存較好。

缺點:但醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞漿內(nèi)蛋白質(zhì)保存效果較差,使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間膠長,抗原會流失而減弱反應(yīng)強度。

室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,-20℃保存

4. 甲醛(福爾馬林)

優(yōu)點:形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,且穿透性強,

缺點:甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色;分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露??稍斐杉訇幮缘娜旧Y(jié)果。

以多聚甲醛為例進行固定

1.準(zhǔn)備4%多聚甲醛(PFA),于4℃冰箱中保存,使用時常溫復(fù)溫。

2.在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的爬片用PBS浸洗3次,每次3 min,輕輕晃動,避免將細胞沖掉。

3.用4%的多聚甲醛固定爬片15 min(細胞自帶熒光時注意避光),PBS浸洗爬片3次,每次3 min。

4.Triton X-100(PBS配制,濃度根據(jù)實驗調(diào)整)室溫通透20 min。

5.PBS浸洗爬片3次,每次3 min。

6.按實驗需求進行后續(xù)實驗。

細胞爬片封片

封片前根據(jù)實驗需求決定是否需要孵育抗體或復(fù)染核。孵育好后用PBS浸洗3次,用吸水紙吸干爬片上的液體,封片液封片。

細胞爬片注意事項

固定好的細胞爬片建議盡快用于實驗,以免影響實驗效果。

取爬片時注意控制力度,夾取時盡量夾取爬片邊緣,以免夾破爬片或造成劃痕。

細胞爬片取出后,一般用PBS潤洗3遍(潤洗操作盡量輕柔,以免細胞脫壁;根據(jù)研究目的,可調(diào)整潤洗次數(shù),避免細胞脫壁),然后做固定。

對于貼壁性較差的細胞,可提前用包被液(明膠,多聚賴氨酸,鼠尾膠原等)包被爬片。

如果細胞帶有熒光標(biāo)記,所有操作步驟盡量在較暗處進行。

使用細胞爬片時(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,加細胞懸液時常常就是細胞鋪滿整個孔底,有時細胞生長邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細胞數(shù)量就可能相對較少)。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,加細胞懸液時只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣。

按照實驗設(shè)計,作用一定時間后取玻片。注意細胞不能太密,否則容易掉片。

推薦閱讀

熱門細胞產(chǎn)品推薦

上一篇:MC3T3-E1 Subclone 14細胞成骨誘導(dǎo)實驗步驟

下一篇:細胞免疫熒光原理,實驗步驟,應(yīng)用和常見問題

版權(quán)說明:本文:“細胞爬片固定實驗步驟及注意事項:http://www.shgcyx.com/question/4765.html”,若本站收錄的信息如有侵權(quán),請發(fā)送郵件至 2205839769@qq.com,一經(jīng)查實,本站將立刻刪除。
X細胞爬片固定實驗步驟及注意事項-常見問題-ATCC細胞庫_原代動物細胞購買-細胞資源庫平臺

截屏,微信識別二維碼

微信號:18046200267

(點擊微信號復(fù)制,添加好友)

  打開微信

微信號已復(fù)制,請打開微信添加咨詢詳情!
在線客服
聯(lián)系方式

公司電話

18046200267

微信二維碼
岐山县| 贵港市| 平凉市| 南开区| 离岛区| 平果县| 永新县| 久治县| 壤塘县| 乌苏市| 凤冈县| 巢湖市| 华亭县| 盱眙县| 屯昌县| 广昌县| 马龙县| 昭平县| 秦安县| 廊坊市| 阳江市| 海林市| 连江县| 永丰县| 外汇| 沈丘县| 阜阳市| 芦山县| 五常市| 溧阳市| 宁海县| 仪陇县| 淮南市| 漾濞| 柳林县| 和林格尔县| 那曲县| 武陟县| 武川县| 大埔区| 鹿泉市|