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第一節(jié):復(fù)蘇細(xì)胞收貨處理教程

發(fā)布時間:2020-05-05 16:19:55 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量:335

本視頻為廈門逸漠生物科技有限公司出品關(guān)于復(fù)蘇細(xì)胞到貨如何處理,我們對每一步操作都做了演示,以便實驗者更好地理解常溫運(yùn)輸細(xì)胞轉(zhuǎn)移實驗過程。


細(xì)胞收貨處理(T25瓶)

實驗準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌,工作臺開燈通風(fēng)10min,用75%酒精擦拭臺面

所需試劑物品

完全培養(yǎng)基、胰酶、PBS

到貨處理

1.在細(xì)胞間拆封包裹,閱讀細(xì)胞說明書和檢測報告

2.取出T25瓶,檢查是否在運(yùn)輸過程中破損,在顯微鏡下鏡檢并拍照存檔

3.放入培養(yǎng)箱穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),約2-4小時

4.2-4小時后拿出T25細(xì)胞瓶,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定密度85%以上,即進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)移步驟

細(xì)胞遷移步驟

第一步:吸出運(yùn)輸用培養(yǎng)基,加入5m」1xPBS清洗1遍,去掉PBS,加入2m1胰酶消化,并放入培養(yǎng)箱孵育1-2min

第二步:在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落,加入3mI完全培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打細(xì)胞,使其脫離瓶壁

第三步:細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管中,1000rpm離心5min

第四步:拿出一個新的10cm培養(yǎng)皿,加入8-10ml完 全培養(yǎng)基,在皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱,培養(yǎng)基名稱,日期

第五步:離心結(jié)束后,用75%的酒精噴管身后,放回工作臺中,去上清,加入1m]完全培養(yǎng)基,重懸后加到10cm培養(yǎng)皿中,放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)

注意事項

1.收到細(xì)胞后,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系

2.靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照),記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)

3.由于運(yùn)輸?shù)脑?,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決

4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致

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