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第四節(jié):貼壁細(xì)胞傳代步驟

發(fā)布時(shí)間:2020-05-13 16:36:56 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量:487

本視頻為廈門逸漠生物科技有限公司出品關(guān)于貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)步驟操作指南,我們對每一步操作都做了演示,以便實(shí)驗(yàn)者更好地理解貼壁細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)過程。


貼壁細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌,工作臺開燈通風(fēng)10min,用75%酒精擦拭臺面

貼壁細(xì)胞傳代所需試劑物品

細(xì)胞培養(yǎng)液,胰酶,PBS,培養(yǎng)皿等

貼壁細(xì)胞傳代步驟

從培養(yǎng)箱拿出細(xì)胞,在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度和細(xì)胞狀態(tài),當(dāng)細(xì)胞狀態(tài)良好,且密度達(dá)到80%以上時(shí),即可進(jìn)行傳代;

第一步:將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入超凈工作臺中,吸去上清,沿血壁加入5ml PBS;

第二步:輕洗細(xì)胞表面,洗去表面培養(yǎng)基,再將PBS棄去;

第三步:加入2ml胰酶,37℃消化1-2分鐘,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否脫落;

第四步:加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化,將細(xì)胞吹散,移入15ml離心機(jī)管中,1000rpm,離心5min;

第五步:取兩個(gè)新的培養(yǎng)皿,各加入8-10m1完全培養(yǎng)基,在培養(yǎng)皿上標(biāo)記細(xì)胞名稱,日期和所用培養(yǎng)基名稱;

第六步:離心結(jié)束后,用75%的酒精噴管身后,放回工作臺中,吸去上清;

第七步:取2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,平均分配到2個(gè)皿中,“8字法”搖勻后,鏡檢是否鋪勻;

第八步:把培養(yǎng)皿放入C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天觀察貼壁情況;

注意事項(xiàng)

1.培養(yǎng)過程中需維持細(xì)胞處于對數(shù)生長期,80%左右即可傳代,傳代比例請參照說明書建議;

2.消化時(shí)間不宜過長,大部分細(xì)胞回縮變圓并有少量細(xì)胞脫落即可中止消化,難消化的細(xì)胞可分次消化,每次時(shí)間不超過5min。

3.培養(yǎng)過程中需要定期換液,一般細(xì)胞建議2-3天換液一次。

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