小鼠破骨細(xì)胞簡介

小鼠破骨細(xì)胞分離自骨組織和骨髓;破骨細(xì)胞是骨組織中的多核巨細(xì)胞，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認(rèn)為破骨細(xì)胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng)，其前體可能屬于造血干細(xì)胞的前單核細(xì)胞。破骨細(xì)胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數(shù)學(xué)者從破骨細(xì)胞著手研究破骨細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機(jī)制。但破骨細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，屬于不增殖細(xì)胞群，不能增殖和傳代，只能進(jìn)行原代培養(yǎng)且存活時(shí)間較短。

小鼠破骨細(xì)胞原代分離培養(yǎng)所需試劑

小鼠破骨細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基、小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基、PBS磷酸緩沖液、紅細(xì)胞裂解液、破骨細(xì)胞培養(yǎng)添加物A、破骨細(xì)胞培養(yǎng)添加物B(試劑介紹完之后補(bǔ)充一句“以下簡稱添加物A,添加物B”)

小鼠破骨細(xì)胞原代分離傳代及鑒定方法

小鼠骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)法

(1)6-8周齡小鼠頸椎脫臼處死，75%酒精浸泡滅菌10 min；

(2)取雙側(cè)股骨、脛骨，用無菌注射器吸取無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗骨髓腔3次，收集液體于15 mL離心管中， 1200 r/min離心3min；

(3)棄上清液，加入5 m紅細(xì)胞裂解液，4℃裂解15 min；

(4)300g離心10min，棄上清液，用小鼠破骨細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸；

(5)1200 r/min離心3 min，棄上清液，用5 ml小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基重懸，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置入5% CO2、37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)箱過夜(約24 小時(shí))；

(6)收集上清離心，棄上清液，用5 mL含有添加物A的小鼠破骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基重懸后，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中(5x10^5 cells/cm2)，2天后細(xì)胞貼壁。

(7)棄上清液，用無菌PBS清洗2次。胰酶消化、反復(fù)吹打后收集液體，離心，棄上清液。重懸后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇合適細(xì)胞密度接種于不同細(xì)胞培養(yǎng)皿中(5x10^5 cells/cm2)；

(8)加入含培養(yǎng)添加物A添加物B的完全培養(yǎng)基，每兩天換液，4-6天后即可誘導(dǎo)出成熟的破骨細(xì)胞。

小鼠破骨細(xì)胞鑒定

1. 形態(tài)觀察

小鼠破骨細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈多核巨細(xì)胞，細(xì)胞屬于終末分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群

2. 標(biāo)志物檢測

第七天進(jìn)行TRAP染色，2.5%戊二醛固定細(xì)胞10 min，蒸餾水充分沖洗，用TRAP染液處理50 min，蒸餾水充分沖洗后甘油封片。陽性染色細(xì)胞呈紅色，定位于胞漿, 陰性染色細(xì)胞呈黃色