MCF-7細(xì)胞背景概述

MCF7 細(xì)胞保留了多個(gè)分化了的乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成圓形復(fù)合物。MCF-7細(xì)胞含有Tx-4癌基因;腫瘤壞死因子α可以抑制MCF7 細(xì)胞的生長(zhǎng)，抗雌激素處理MCF-7細(xì)胞能調(diào)變IGFBP'S的分泌。

MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)條件及注意事項(xiàng)

ATCC細(xì)胞庫MCF-7細(xì)胞圖片

逸漠細(xì)胞庫MCF-7細(xì)胞圖片

MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin。

培養(yǎng)條件氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度70%-80%。

MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1.必須加入胰島素的。胰島素是由胰島β細(xì)胞分泌的一種多肽激素。胰島素是無血清哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中的普遍添加物質(zhì)。在許多細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮重要作用：如促進(jìn)糖和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)，提高合成代謝降低分解代謝，刺激細(xì)胞生長(zhǎng)等等。重組人胰島素為重組技術(shù)生產(chǎn)的由51個(gè)氨基酸殘基組成的多肽。

2.MCF-7細(xì)胞細(xì)胞貼壁較慢，處理后最好48h后再觀察。MCF-7剛復(fù)蘇時(shí)長(zhǎng)得很慢很慢，主要看貼壁的細(xì)胞是不是已經(jīng)舒展開來(三角形或多邊形)，其次，看貼壁細(xì)胞是否開始分裂，形成一個(gè)一個(gè)的細(xì)胞群(MCF-7具上皮細(xì)胞的性質(zhì))。如果開始增殖，就是好現(xiàn)象?；謴?fù)后，會(huì)長(zhǎng)得快一點(diǎn)，但和其他的乳腺癌細(xì)胞沒得比，還是不快，傳代時(shí)比例不要太大。還有，這個(gè)細(xì)胞恢復(fù)時(shí)貼壁比較慢，但貼得很牢，消化時(shí)胰酶處理要適合，免得大量的細(xì)胞仍在皿上不下來。

3.要注意MCF-7人乳腺癌細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞，生長(zhǎng)規(guī)律性差，很容易不均勻，要注意吹打的充分性。

MCF-7細(xì)胞特點(diǎn)

1.成團(tuán)簇的形式生長(zhǎng)

由于mcf-7細(xì)胞是三維團(tuán)簇的方式生長(zhǎng)，復(fù)蘇和傳代后會(huì)重新附著為三維島(會(huì)有一些不會(huì)重新附著的簇)。生長(zhǎng)最終會(huì)從島嶼狀慢慢擴(kuò)散開來，隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞會(huì)緩慢變成單層，這個(gè)時(shí)候細(xì)胞基本處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。

2.生長(zhǎng)緩慢

倍增時(shí)間：1.8天(PubMed=9671407);80小時(shí)(PubMed=25984343);31.2小時(shí)(PubMed=22628656)25.3小時(shí)(PubMed=24389870)25.4小時(shí)(NCI-DTP)~50小時(shí)，范圍為30-72小時(shí)(DSMZ)~38小時(shí)(PBCF)。

3.傳代比例

MCF-7人乳腺癌細(xì)胞是一種本身生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)至細(xì)胞 70-80% 的匯合度，即可進(jìn)行分瓶處理，一般T25培養(yǎng)瓶建議1:2傳代，每周可傳代2-3次，如果細(xì)胞生長(zhǎng)速度比正常的時(shí)候更慢，可以適當(dāng)提高血清到20%有利于促進(jìn)生長(zhǎng)。

4.貼壁率低

MCF-7細(xì)胞在復(fù)蘇、傳代后，細(xì)胞會(huì)有一些漂浮狀態(tài)，這些漂浮細(xì)胞是正?，F(xiàn)象，可以視為混合的貼壁和懸浮細(xì)胞系。一般復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)3天后漂浮細(xì)胞會(huì)再繼續(xù)粘附貼壁。直到生長(zhǎng)從島嶼擴(kuò)散開來并且在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)伸展開，通常在進(jìn)行換液的時(shí)候我們會(huì)補(bǔ)加培養(yǎng)基，如果一定要全換液，可以通過離心收集懸浮細(xì)胞以1000轉(zhuǎn)5min，并將懸浮細(xì)胞接種到新培養(yǎng)瓶。

5.密度依耐性

Mcf-7細(xì)胞密度低時(shí)，生長(zhǎng)緩慢，接種密度建議啟動(dòng)接種密度：8.0 x 10 4至 1.5 x 10 5活細(xì)胞/cm 2為宜;繼代培養(yǎng)的接種密度：4.0 x 10 4 至 1.0 x 10 5 活細(xì)胞/cm 2。

MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

提前開啟紫外照射30min消毒滅菌，工作臺(tái)開燈通風(fēng)10min，用75%酒精擦拭臺(tái)面

MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)操作

MCF-7細(xì)胞復(fù)蘇步驟

1.將含有1 mL MCF-7細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。

2.在1000 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。

3.然后將所有MCF-7細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。

MCF-7細(xì)胞傳代處理

如果MCF-7細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

傳代方法：1:2至1:3，每周 2-3次

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗MCF-7細(xì)胞1-2次。

2.加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細(xì)胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

3.將MCF-7細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

MCF-7細(xì)胞凍存操作

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

凍存條件：無血清凍存液(或者冷凍保存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配)，液氮儲(chǔ)存。

下面 T25 瓶為例

1.收集MCF-7細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2.根據(jù)MCF-7細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3.將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

MCF7人乳腺癌細(xì)胞總結(jié)

1.MCF7呈上皮細(xì)胞樣，保留多個(gè)分化乳腺上皮特性。

2.MCF7細(xì)胞常用DMEM培養(yǎng)基，含10%胎牛血清，在37度、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。該細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁相對(duì)較慢，每周2-3次更換新鮮培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需添加0.01mg/mL 胰島素。

3.細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量要求高，推薦使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清。

4.細(xì)胞消化較快，室溫消化即可消化時(shí)不要通過敲擊或搖晃培養(yǎng)瓶來攪動(dòng)細(xì)胞，以免形成細(xì)胞團(tuán)。

5.細(xì)胞生長(zhǎng)較快，需及時(shí)傳代，否則容易導(dǎo)致整瓶細(xì)胞漂浮。