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HPAC-NLuc-puro人胰腺癌細(xì)胞成瘤驗證

發(fā)布時間:2025-04-25 08:56:09 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量:45

人胰腺癌是一種高度惡性的消化道腫瘤,其中胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)占90%以上,因其早期癥狀隱匿、侵襲性強(qiáng)、易發(fā)生轉(zhuǎn)移及治療抵抗性而被稱為“癌中之王”。全球范圍內(nèi),胰腺癌的五年生存率不足10%,其高死亡率與腫瘤復(fù)雜的微環(huán)境(如致密間質(zhì)增生、免疫抑制及代謝異常)密切相關(guān),導(dǎo)致傳統(tǒng)治療手段(手術(shù)、化療等)效果有限。構(gòu)建胰腺癌成瘤模型(如基因工程小鼠模型、患者來源異種移植模型或3D類器官模型)對深入解析其發(fā)病機(jī)制、篩選有效治療靶點及評估藥物療效至關(guān)重要。這些模型能夠模擬腫瘤異質(zhì)性、微環(huán)境互作及治療抵抗特征,為開發(fā)靶向治療、免疫治療及個體化精準(zhǔn)策略提供可靠平臺,最終推動基礎(chǔ)研究向臨床轉(zhuǎn)化的突破。

細(xì)胞簡介

細(xì)胞名稱:HPAC-NLuc-puro人胰腺腺泡上皮癌(NLUC標(biāo)記)

種屬來源:人

組織來源:胰腺

生長特性:貼壁生長

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

背景介紹:Luciferase HPAC細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株是由一名(患有中分化至高分化導(dǎo)管源性胰腺癌)女性患者的原發(fā)性腫瘤裸鼠異種移植物中分離。

puro藥篩濃度:HPAC-NLuc-puro細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml puro維持

培養(yǎng)須知:首次復(fù)蘇或長期未用嘌呤霉素時,建議用含嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48小時以清除非抗性細(xì)胞。建議定期備份低代次細(xì)胞,并記錄熒光素酶活性數(shù)據(jù)以確保實驗一致性。如有特殊需求(如無血清培養(yǎng)),需逐步馴化并驗證基因穩(wěn)定性。雙標(biāo)記(NLuc+Puro)確保長期基因穩(wěn)定性,但需持續(xù)篩選壓力。

HPAC-NLuc-puro細(xì)胞在小鼠體內(nèi)成瘤案例(僅供參考)

接種方法 模型類型 小鼠品系成瘤率成瘤時間腫瘤特性轉(zhuǎn)移傾向 檢測方法
皮下注射(2×10?細(xì)胞,Matrigel輔助) 異種移植BALB/c裸鼠95% (19/20)3-4周 表達(dá)NLuc,可實時監(jiān)測腫瘤生長動態(tài)局部侵襲,無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生物發(fā)光成像+組織病理
原位注射(1×10?細(xì)胞,NLUC標(biāo)記)  原位模型NSG小鼠85% (17/20)4-5周 高分化腺癌,強(qiáng)熒光素酶信號肝轉(zhuǎn)移(25%),腹膜播散活體成像(IVIS)
尾靜脈注射(5×10?細(xì)胞)轉(zhuǎn)移模型NOD/SCID60% (6/10)2-3周 肺和肝微轉(zhuǎn)移灶,NLuc信號追蹤多器官微轉(zhuǎn)移(肺/肝)活體成像+免疫組化

同類胰腺癌細(xì)胞系成瘤能力對比(僅供參考)

產(chǎn)品貨號細(xì)胞系成瘤率  成瘤時間 轉(zhuǎn)移傾向應(yīng)用場景
IM-H157HPAC+++ 3-5周低至中度(肝/淋巴結(jié))高分化,保留胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)志物(CK19+)
IML-164 HPAC-NLuc-puro+++ 3-5周中度(肝/腹膜/肺)NLUC標(biāo)記支持活體成像,適合縱向轉(zhuǎn)移追蹤
IM-H160 PANC-1++ 6-8周極低(局部侵襲)低分化,KRAS突變,耐化療
IM-H159MIA PaCa-2+++ 2-3周低分化,缺乏黏液分泌
IM-H165BxPC-3++ 8-10周 KRAS野生型,對EGFR抑制劑敏感
IM-H340AsPC-1+++ 4-5周高(腹膜/肝轉(zhuǎn)移)高侵襲性,EMT表型顯著
IM-H154Capan-1 +10-12周 低 高分化,保留黏蛋白分泌能力

HPAC-NLuc-puro細(xì)胞成瘤影響因素及優(yōu)化策略

類別具體因素影響說明優(yōu)化策略
細(xì)胞活力與預(yù)處理復(fù)蘇后細(xì)胞活性低,增殖能力下降 凍存/復(fù)蘇損傷導(dǎo)致凋亡增加,NLuc信號減弱

-優(yōu)化凍存液配方(含10% DMSO+90% FBS)

- 復(fù)蘇后預(yù)培養(yǎng)至對數(shù)生長期(≥3代)

宿主免疫狀態(tài)免疫排斥(殘留T/NK細(xì)胞活性)小鼠品系免疫缺陷不徹底,清除異種移植細(xì)胞

- 使用重度免疫缺陷小鼠(如NSG或NOG)

- 接種前小鼠輻照(1-2 Gy)降低殘留免疫

細(xì)胞接種數(shù)量 原位或皮下成瘤效率不穩(wěn)定細(xì)胞數(shù)過低(<1×10?)導(dǎo)致成瘤延遲,過高(>5×10?)引發(fā)局部壞死 

- 原位接種推薦1-2×10?細(xì)胞(含Matrigel)

- 皮下接種2-3×10?細(xì)胞

標(biāo)記基因穩(wěn)定性長期傳代后NLuc/puro抗性丟失基因沉默或質(zhì)粒丟失(尤其未使用抗生素維持)

- 定期用嘌呤霉素(1-2 μg/mL)篩選

- 凍存低代細(xì)胞(≤10代)避免基因漂變

常見問題與解決方案

問題原因解決方案
細(xì)胞污染(細(xì)菌/真菌/支原體)無菌操作不規(guī)范或培養(yǎng)基污染嚴(yán)格無菌操作,定期檢測支原體;丟棄污染細(xì)胞,更換新批次培養(yǎng)基。
細(xì)胞狀態(tài)差,增殖緩慢培養(yǎng)基成分不當(dāng)、傳代過度或細(xì)胞老化

優(yōu)化培養(yǎng)基(如添加特定生長因子),控制傳代次數(shù)(<20代),使用新鮮解凍細(xì)胞。

注射后無法形成腫瘤細(xì)胞活性低、注射量不足或免疫缺陷小鼠品系不符

確保細(xì)胞活性>90%,調(diào)整注射量(通常1×10?~5×10?/小鼠),使用NOD/SCID等重度免疫缺陷鼠。

成瘤速度差異大注射部位不均勻(皮下/原位)、細(xì)胞懸液溫度不當(dāng)

統(tǒng)一注射部位(如右腋下),保持細(xì)胞懸液在冰上操作,避免長時間室溫暴露。

活體成像信號弱或不穩(wěn)定熒光素底物(furimazine)劑量不足或成像時間不當(dāng)

優(yōu)化底物注射量,注射后1-5分鐘成像,避免麻醉過深影響代謝

背景信號干擾

小鼠自發(fā)熒光(如食物殘留)或儀器參數(shù)設(shè)置錯誤

成像前禁食6小時,調(diào)整儀器曝光時間/光圈,設(shè)置陰性對照組校準(zhǔn)背景。

HPAC-NLuc-puro細(xì)胞成瘤實驗設(shè)實例

實驗組處理方式檢測指標(biāo)
對照組注射 HPAC-NLuc-puro 細(xì)胞 + PBS 或溶劑對照。基礎(chǔ)腫瘤生長曲線、生物發(fā)光基線值。
藥物治療組注射細(xì)胞后給予靶向藥物(如吉西他濱、PD-1 抑制劑)。腫瘤體積抑制率、生物發(fā)光信號衰減、生存期延長。
基因干預(yù)組

使用 CRISPR/shRNA 敲除特定基因(如 KRAS)的 HPAC-NLuc-puro 細(xì)胞進(jìn)行成瘤實驗。

基因功能與腫瘤生長的相關(guān)性分析(如轉(zhuǎn)移能力變化)。


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