常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
發(fā)布時間:2025-05-06 09:58:20 細胞資源庫平臺 訪問量:68
乳腺癌細胞是乳腺上皮細胞在基因突變、表觀遺傳改變及微環(huán)境失衡等多因素作用下形成的惡性轉(zhuǎn)化細胞,具有高度異質(zhì)性,可依據(jù)分子標志物(如ER、PR、HER2及Ki-67)分為不同亞型。其顯著特征包括增殖失控、代謝重編程、免疫逃逸及轉(zhuǎn)移傾向,其中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和腫瘤干細胞特性是導(dǎo)致復(fù)發(fā)耐藥的關(guān)鍵機制。構(gòu)建乳腺癌成瘤模型(如細胞系異種移植模型、患者來源異種移植模型PDX、類器官及基因工程小鼠模型)對揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展機制至關(guān)重要。這些模型可模擬腫瘤微環(huán)境互作、評估靶向藥物敏感性、探索耐藥機制及免疫治療策略,并為個體化治療方案篩選和新藥臨床前評價提供標準化平臺,是銜接基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的重要橋梁。
細胞名稱:4T1-FLuc-puro小鼠乳腺癌細胞(FLUC標記)
種屬來源:小鼠
組織來源:乳房
生長特性:貼壁生長
細胞形態(tài):上皮細胞樣
背景介紹:Luciferase 4T1細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株4T1細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當(dāng)4T1細胞注射到BALB/c小鼠中時,4T1細胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤,可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦,同時在注射部位形成始發(fā)灶,誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近,這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近,可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比,由于4T1細胞的抗6-硫鳥嘌噙特性,微小的轉(zhuǎn)移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到,沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。
puro藥篩濃度:4T1-FLuc-puro細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml,培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml puro維持
培養(yǎng)須知:首次復(fù)蘇或長期未用嘌呤霉素時,建議用含嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48小時以清除非抗性細胞。建議定期備份低代次細胞,并記錄熒光素酶活性數(shù)據(jù)以確保實驗一致性。如有特殊需求(如無血清培養(yǎng)),需逐步馴化并驗證基因穩(wěn)定性。雙標記(FLuc+Puro)確保長期基因穩(wěn)定性,但需持續(xù)篩選壓力。
接種方式 | 接種量(細胞數(shù)) | 成瘤時間(天) | 轉(zhuǎn)移傾向 | 適用研究方向 | 優(yōu)缺點 |
乳腺脂肪墊原味接種 | 1×10? - 1×10? | 5-7天可觸診腫瘤 | 高(肺、肝、骨轉(zhuǎn)移;21天>80%) | 轉(zhuǎn)移機制、腫瘤微環(huán)境、免疫治療研究 | 優(yōu)點:模擬原位微環(huán)境,轉(zhuǎn)移真實性強; 缺點:需手術(shù)操作,技術(shù)要求高 |
皮下接種 | 1×10? - 5×106 | 7-10天形成可見瘤塊 | 低(局部生長為主,罕見遠處轉(zhuǎn)移) | 藥物療效評估、原位腫瘤生長動力學(xué)研究 | 優(yōu)點:操作簡單,便于監(jiān)測體積; 缺點:轉(zhuǎn)移率低,微環(huán)境差異大 |
尾靜脈注射 | 2×10? - 5×10? | 不形成原發(fā)瘤 | 快速肺轉(zhuǎn)移(7-14天肺轉(zhuǎn)移灶形成) | 血行轉(zhuǎn)移機制、抗轉(zhuǎn)移藥物篩選 | 優(yōu)點:直接研究轉(zhuǎn)移過程; 缺點:無法觀察原發(fā)瘤進展 |
脛骨原位接種 | 1×10? | 10-14天骨破壞明顯 | 局部骨轉(zhuǎn)移(伴破骨細胞活化) | 乳腺癌骨轉(zhuǎn)移模型、骨靶向治療研究 | 優(yōu)點:模擬骨轉(zhuǎn)移特異性病理; 缺點:需影像學(xué)監(jiān)測,成本高 |
腹腔注射 | 5×10? - 1×10? | 不形成實體瘤 | 腹腔播散(肝、腹膜轉(zhuǎn)移為主) | 腫瘤腹水模型、全身性藥物分布研究 | 優(yōu)點:適合研究播散性轉(zhuǎn)移; 缺點:無法定量評估原發(fā)灶 |
小鼠品系:4T1-FLuc-puro需接種于免疫健全的BALB/c小鼠(同源模型)。
監(jiān)測方法:熒光素酶活性檢測:腹腔注射D-熒光素(150 mg/kg),通過IVIS成像定量信號強度。
倫理規(guī)范:腫瘤體積需符合動物福利上限(通?!?000 mm3)。
產(chǎn)品貨號 | 細胞系 | 接種量(細胞數(shù)) | 成瘤時間(天) | 成瘤率 | 轉(zhuǎn)移傾向 | 激素受體表達 | 適用研究方向 |
IM-M017 | 4T1 | 1×104 - 1×106 | 5-7 | >95% | 高(肺、肝、骨) | ER-/PR-/HER2- | 轉(zhuǎn)移機制、免疫治療、耐藥性研究 |
IM-M059 | EMT6 | 5×105 | 10-14 | 80%-90% | 低(局部侵襲) | ER-/PR-/HER2- | 放射治療、化療敏感性評估 |
IM-M099 | E0771 | 2×105 | 7-10 | 85%-95% | 中等(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) | ER+/PR+ | 激素依賴性腫瘤、內(nèi)分泌治療研究 |
IM-M123 | 67NR | 1×105 | 7-10 | >90% | 無 | ER-/PR- | 原位腫瘤生長、血管生成研究 |
IML-021 | 4T1-FLUC-puro | 1×104 - 1×106 | 5-7 | >90% | 高(肺轉(zhuǎn)移為主) | ER-/PR-/HER2- | 活體成像、藥物動力學(xué)動態(tài)監(jiān)測 |
影響因素 | 具體說明 |
細胞活性與狀態(tài) | 細胞傳代次數(shù)過高(>20代)或凍存復(fù)蘇不當(dāng)(活性<80%)會導(dǎo)致成瘤延遲或失敗 |
接種細胞數(shù)量 | 接種量過低(<1×10?)成瘤率下降;過高可能引發(fā)壞死或免疫排斥 |
接種部位與操作 | 乳腺脂肪墊原位接種需精準定位,皮下接種過淺易導(dǎo)致細胞滲漏 |
小鼠品系與免疫狀態(tài) | 需使用BALB/c(同源模型),免疫缺陷鼠(如NOD/SCID)可能改變轉(zhuǎn)移模式 |
熒光素酶表達穩(wěn)定性 | 長期傳代或未加抗生素(Puromycin)維持篩選可能導(dǎo)致熒光素酶信號衰減 |
實驗環(huán)境與監(jiān)測 | 溫度波動、營養(yǎng)不良或應(yīng)激(如頻繁抓取)可能抑制腫瘤生長 |
優(yōu)化方向 | 具體策略 | 預(yù)期效果 |
細胞預(yù)處理 | - 使用低傳代數(shù)細胞(<15代),復(fù)蘇后培養(yǎng)48小時再接種 - 接種前檢測細胞活性(>90%)及熒光素酶活性 | 提高成瘤率及信號一致性 |
接種技術(shù)優(yōu)化 | - 乳腺脂肪墊接種:麻醉后經(jīng)第四對乳頭旁切口注射,避免損傷血管 - 皮下接種:使用高粘度基質(zhì)(如Matrigel)減少滲漏 | 提升原位成瘤效率,減少操作誤差 |
小鼠管理 | - 選擇8-10周齡雌性BALB/c小鼠,避免激素周期干擾 - 提供高脂飼料(含10%脂肪)促進腫瘤血管生成 | 縮短成瘤時間,增強轉(zhuǎn)移傾向 |
熒光素酶維持 | - 定期用Puromycin(1-2 μg/mL)壓力篩選,防止標記基因丟失 - 活體成像前禁食6小時降低背景噪聲 | 確保信號穩(wěn)定性,提高成像信噪比 |
實驗條件控制 | - 保持恒溫(22-24℃)、濕度(40-60%)及12小時光照周期 - 減少人為干擾(如固定監(jiān)測時間及操作人員) | 降低環(huán)境應(yīng)激對腫瘤生長的干擾 |
常見細胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
細胞聚團的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團細胞的生成;首先確認當(dāng)前細胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進行······
細胞有空泡原因分析及解決方法:出現(xiàn)細胞空泡情況有1.細胞老化2.培養(yǎng)液錯誤配制;3.細胞消化時操作不當(dāng);4.污染等等,如細胞老化,解決方法,原代細胞使用較低代次進行實驗,傳代細胞避免傳代次數(shù)過高···
細胞半換液和全換液操作步驟:第一種方式:細胞全換液;如果是貼壁細胞,可以用全量換液法,直接吸去全部舊培養(yǎng)基,補充足量新鮮完全培養(yǎng)基;第二種方式:細胞半換液;"細胞半換液"又稱"細胞半量換液",即棄掉一半舊的培養(yǎng)基,再······
細胞生長緩慢的可能原因有哪些:細胞培養(yǎng)外部因素包括細胞培養(yǎng)基的配方和質(zhì)量問題,培養(yǎng)條件不理想,污染問題,細胞自身因素包含細胞的健康狀態(tài),細胞密度過高或過低,細胞老化現(xiàn)象,細胞特性,當(dāng)細胞生長出現(xiàn)緩慢的問題時,我······
常用胰腺癌細胞株動物模型及胰腺癌細胞株有哪些:胰腺癌研究中常用的動物模型主要包括化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型,基因工程胰腺癌小鼠模型和胰腺癌移植模型,常用的胰腺細胞株MIA-PACA-2人胰腺癌細胞,Capan-2人胰腺癌細······
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